SRM998血管紧张素I(美国nist标准品)

SRM998血管紧张素I(美国nist标准品)主要用于肾素测定的校准和标准化，以及作为氨基酸分析和高效液相色谱法(HPLC)的参考肽。

SRM 998的一个单位由0.5 mg化学合成的血管紧张素Ⅰ组成。

经认证的血管紧张素Ⅰ纯度值通过HPLC进行评估，并通过核磁共振(NMR)在报告的不确定性范围内间接确认。在HPLC程序中，肽含量通过标准添加法测量，使用溶解在1 mol/LKOH 中的苯丙氨酸作为添加标准。SRM溶液和添加的标准溶液在6 mol/LHCl中水解并测定氨基酸组成。苯丙氨酸浓度通过绝对重量和通过测量标准溶液的吸光度并使用表观比摩尔吸光度209±0.2L/gcm 计算浓度来确定。苯丙氨酸与四种氨基酸（缅氨酸、亮氨酸、组氨酸和精氨酸）中每一种的浓度比用于计算每个样品中总肽的量。所有报告的不确定度均表示为所列值的正负一个标准误差。参考醋酸盐含量值由单—方法确定。

SRM998血管紧张素I(美国nist标准品)应存放在-20°C的密封玻璃安瓿中，在打开前应允许加热到房间温度。

该材料是从贝克曼仪器公司，生物产品业务(帕洛阿尔托，加利福尼亚州)。

使用在 5000 kPa 压力下操作的 25 cm x0.4 cm 十八烷基硅烷柱对溶解的 25 ug 该 SRM 998  血管紧张素I  标准品样品进行液相色谱分析。样品已溶解在 8l 体积份 0.l molL 三乙胺磷酸盐缓冲液（pH 3.5）和 19 体积份乙腈溶液中。使用了两种溶液：一种是用于溶解 SRM 的相同成分的溶液；另一种是用于溶解 SRM 的溶液。另一种是75体积份缓冲液与25体积份乙腈的溶液。通过在 215 nm 和 280 nm 处测量吸光度来监测洗脱。在 81:19 的洗脱液比下，在 2l5 nm 处检测到保留时间分别为 16.6 minutcs 和 12.2 min 的主峰和次峰，在 280 nm 处仅检测到主峰。每个峰对应的物质为收集，在 6 molL HCl 中水解并分析氨基酸组成。主峰的氨基酸含量表明它是血管紧张素 I。次峰（<1% 的 215 nm 吸光度）不含可检测到的肽材料。在这些 HPLC 条件下，乙酸盐聚集在溶剂前沿并且无法定量。在 75:25 的洗脱液比例下，在该波长处未检测到额外的峰，表明不存在非肽、UV 吸收材料。

用4 0 0 MHz核磁共振波谱仪在脉冲傅里叶变换模式下测定了6种SRM样品的乙酸含量。用整个样品(约0.5mg)在0.5mL氧化氘(100原子%D)中溶解，制备了分析溶液。在Cach溶液中加入少量的钠-4，4-二甲基-4-硅戊酸酯2，2，3，3-DS作为内参。由于在8.1.922处发现乙酸甲酯质子信号与血管紧张素l的质子信号重叠，因此血管紧张素Ⅰ的一种乙酰丙酮法初步准备用于确定乙酸酯峰下信号的准确质子计数。用0.02 mol HCl对该样品进行了两次冻干处理，结果表明，该样品不含乙酸酯，其光谱感兴趣区为3个。在此基础上，对THC SRM样品进行了不冻干分析，从缩醛甲基峰及其信号的总积分中减去三个质子的适当积分值，得到乙酸峰的积分。三个质子积分的适当值是通过在高能量区总共29个质子信号的积分平均值确定的，其中包括许多源自血管紧张素l的甲基、甲基和甲基质子的质子信号。质子信号的数字积分用图表纸绘制，并进行了处理。使用下列仪器参数：数据集的大小，16384点；4 US(30°翻转角)；光谱宽度，4 kHz，扫描次数，2000年；弛豫延迟，1.95秒。