SRM972a维生素-D标准物质(美国NIST)

SRM972a维生素-D标准物质(美国NIST)旨在用作对确定人血清中维生素-D代谢物的物质浓度的方法进行严格评估的准确度控制。SRM972a维生素-D标准物质还可用作质量保证工具，用于为这些成分的内部控制材料分配值。SRM 972a由四个小瓶(1到4级)冷冻血清组成，其中含有不同浓度的25-羟基维生素-D和24r，25-二羟基维生素-D3。

测量血清中的总25(OH)D浓度，即25-羟基维生素-D2和25-羟基维生素，D3[25(OH)D3]的总和，通常被认为是维生素-D状态的可靠指标.。3-环氧-25-羟基维生素-D3[3-epi-25(OH)D3]的浓度通常不包括在总25(OH)D中，但该代谢物对某些维生素-D代谢物测定构成潜在的测量干扰24r，25-二羟基维生素-D3的测量血清中的含量被认为是分解代谢的标志物和肾脏疾病的指标。每瓶SRM 972a含有大约1 mL血清。

SRM972a维生素-D标准物质(美国NIST)的四个水平中的每一个都以25(OH)D的特定目标水平制备。虽然某些测量方法可能适用SRM 972a的四个级别中的每一个，但要认识到某些方法可能不适用于某些级别。个人用户将需要评估哪个级别或哪些级别极适合他们的特定需求。

SRM972a维生素-D标准物质(美国NIST)中 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3 浓度的赋值基于 NIST (ID) 两种分析方法提供的结果的组合-LC-MS 和 ID-LC-MS/MS）以及来自 CDC 的两个 ID-LC-MS/MS 分析程序。 24R、25(OH)2D3 浓度的赋值基于 NIST 的 ID-LC-MS/MS 结果。通过 ID-LC-MS (NIST) 测量 25(OH)D3、25(OH)D2 和 3-epi-25(OH)D3：血清 (450 mg) 和含有 2 H6-25( OH)D3、2 H3-25(OH)D2 和 2 H3-3-epi-25(OH)D3 在玻璃管中混合，沉淀蛋白质，将代谢物萃取到己烷中两次。合并己烷相并在氮气下在40°C蒸发至干。残留物用甲醇复溶，涡流混合。使用 LC-MS 和 (1) Ascentis Express F5 五氟苯丙基色谱柱 (Supelco, Bellefonte, PA) 和 (2) Zorbax SB-CN 氰丙基固定相色谱柱 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) 分析提取物。五氟苯丙基色谱柱的分析在等度流动相为 26% 水和 74% 甲醇，流速为 0.8 mL/min。所有溶剂组成均以百分比表示体积分数。柱温保持在 15 °C。在运行结束时将梯度梯度加入到 100% 甲醇中，以洗脱保留的基质成分。在等度条件下对氰丙基色谱柱进行分析，流动相为 33% 水和 67% 甲醇（SRM 972a 的 1、2 和 4 级）或 34% 水和 66% 甲醇（3 级），流速为1.0 毫升/分钟。在运行结束时将梯度梯度加入到 100% 甲醇中，以洗脱保留的基质成分。柱温保持在 45 °C。

表1提供了25(OH)D3、25(OH)D2、3-epi-25(OH)D3和24r、25(OH)2D3的认证值.认证值是一个值对其准确性的信心最高，因为所有已知或可疑的偏差来源都已被调查或考虑在内[1]。认证值25(OH)D3、25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3是基于同位素稀释液相色谱质谱(ID-LC-MS)[2]和同位素稀释液的结果一致色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)[3]在NIST执行的程序，以及在佐治亚州亚特兰大的疾病控制和预防中心(CDC)执行的两种不同的ID-LC-MS/MS程序[4.5]。24r、25(OH)2D3的认证值基于使用ID-LC-MS/MS进行的参考测量程序的结果NIST[6]。NIST和CDCID-LC-MS/MS方法被检验医学可追溯性联合委员会(JCTLM)[7，8]认定为高阶参考测量程序。

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表2提供了25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的参考值。参考值是未经认证的值，是根据现有数据对真实值的最佳估计;然而，这些值不符合NIST的认证标准，并且提供了相关的不确定性，这些不确定性可能仅反映测量精度，可能不包括所有不确定性来源，或者可能反映多种分析方法之间缺乏足够的统计一致性[1]。25(OH)D2和3-epi-25(OH)D3的参考值基于在NIST和ID-LC-执行的ID-LC-MS和ID-LC-MS/MS程序结果的一致性。CDC提供的MS/MS.结果。

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