微生物基因组DNA序列标准RM 8375旨在用于微生物全基因组测序的验证、优化、过程评估和性能评估。特别注意评估基因组序列。该材料旨在帮助评估高通量微生物 DNA 测序方法的性能。该基因组 DNA 已从细胞培养物中提取。因为 RM 是提取的 DNA,所以它不评估 DNA 提取等分析前步骤。然而,它确实对测序文库制备、测序机器、碱基调用算法和随后的生物信息学分析提出了挑战。微生物基因组DNA序列标准RM 8375并非旨在评估其他生物信息学步骤,例如菌株鉴定、系统发育分析或基因组注释。基因组 DNA 的纯度被评估为适合这些目的。
微生物基因组DNA序列标准RM 8375的一个单元由四个小瓶组成。每个小瓶包含不同的微生物基因组 DNA 样本(MG-001 鼠伤寒沙门氏菌 LT2、MG-002 金黄色葡萄球菌、MG-003 铜绿假单胞菌和 MG-004 产孢梭菌)。
微生物基因组DNA归纳起来主要有如下特点:
一. 原核生物基因组较小,DNA 分子由环状双链或链状 DNA 分子组成。 原核生物基因组结构紧密, 基因间隔序列很少, 蛋白质编码序列在基因组中所占的比例很高(75%~90%), 基因常以操纵子形式存在, 其中的结构基因为多顺反子。 原核生物基因结构比较简单,蛋白质编码基因是从起始密码子开始到终止 密码子结束,长度为 3 的整数倍的一段连续的 DNA 片段。
二. 除少数几个物种外(主要是古细菌),原核生物的基因是一段连续的 DNA 序列,基因组中几乎 没有断裂基因。在大多数情况下,编码蛋白质的结构基因在细胞染色体中是单拷贝的,但编码 rRNA 的 基因往往是多拷贝的。
三. 原核生物基因组中存在重复序列(repeat sequences)。但是存在一些可以在基因组中移动,并可 在生物体之间转移的转座元件(transposable elements),如插入序列(insertion sequences)等,在基因或操纵 子的终点往往具有特殊的终止序列,可导致转录终止和 RNA 聚合酶从 DNA 链上脱落。原核生物基因 组结构(如图 2.5 所示)。
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