空气颗粒性污染物多环芳烃化合物SRM1649b相关分析

空气颗粒性污染物多环芳烃化合物SRM1649b相关实验分析方法：

1.多环芳烃化合物对表皮真皮细胞毒性效应分析：永生化的皮肤角质形成细胞 HaCaT 细胞和皮肤成纤维细胞 NHDF 细胞为研究对象，以国际标准品空气颗粒性污染物多环芳烃化合物 SRM1649b 浸出液为刺激物。研究不同时间条件下(0 小时、6 小 时、12 小时、24 小时，36 小时，48 小时）不同浓度 SRM1649b 对 HaCaT 细胞和 NHDF 细胞增殖活性的影响。传代 HaCaT 细胞和 NHDF 细胞，显微镜下观察有 70-80%的细胞 融合时用于实验，吸去原培养液，加入专用培养基，稀释 SRM1649b，使其终浓度为 (0、50、100、200、400ug/mL)，在不同浓度，不同时间条件下避光孵育，用 CCK8 法检测不同时间点和浓度孵育 SRM1649b 对 HaCaT 细胞和 NHDF 细胞增殖活性的影响； 从而探索出不同浓度，和不同时间点 SRM1649b 浸出液对 HaCaT 及 NHDF 细胞生存率 的影响并选择适宜的实验浓度。

2. 采用流式细胞术检测 SRM1649b 对 HaCaT 和 NHDF 的细胞周期，及凋亡的影响。 采用细胞免疫荧光法观察 空气颗粒性污染物多环芳烃化合物 SRM1649b 浸出液刺激前后 HaCaT 和 NHDF 细胞内芳香族化 合物受体 AhR 的分布变化；

3. 用实时荧光定量 PCR 方法检测各浓度实验组 HaCaT 和 NHDF 细胞中基质金属 蛋白酶 MMP1，MMP3，MMP9 的 mRNA 表达情况。用 Western-blot 方法检测各浓度实验 组 HaCaT 和 NHDF 细胞中基质金属蛋白酶 MMP1 蛋白表达情况。用 ELISA 法检测基质 金属蛋白酶 MMP1 蛋白的细胞外分泌情况；

4. 实时荧光定量 PCR 和 Western-blot 方法检测 PAHs（SRM1649b 浸出液）与受 体（AhR）结合后引起的胞浆及核内下游靶基因的变化，包括 ERK1/2, c-Jun 等调控 分子的磷酸化水平，以及 CYP1A1 等下游靶基因的 mRNA 表达水平；

5. 空气颗粒性污染物多环芳烃化合物 SRM1649b分析加入 AhR 受体拮抗剂后对 HaCaT 和 NHDF 中 MMP1，CYP1A1 等表 达的影响。

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